單親爸爸徐錫宇（孔劉飾演）是證券基金經理，因工作忙碌忽視家人感情，妻子離開他，與女兒秀安（金秀安飾演）的關係也處在低潮。秀安最想要的生日禮物是生日當天到釜山與母親見面，而不是父親送給她的最新遊戲機。
徐錫宇因為忘記缺席學校的親子座談，覺得愧疚答應帶秀安前往釜山。秀安生日當天，他們從首爾搭凌晨5時30分前往釜山的高鐵。開車前一名感染化學病毒的女性闖入車廂，車行間快速發病，咬了前來關心的隨車人員，病毒感染人類速變活屍，一個一個車廂淪陷活屍咬人，人快速病變，人人自危。
《屍速列車》全片最重要的概念其實是恐懼，人為求生存，就有恐懼，恐懼逼出人性極端的善與惡。在密閉空間，人們從電視看到快速感染發病的病毒迅速癱瘓半個國家，回不了頭的列車一路加速到底，更加深認同那份恐懼，人為自己活命，人性的自私自利就顯現出來，再加上主角的情感上串入煽情元素，為愛犧牲。男配角尹相華 （馬東錫 飾演）為救懷孕的妻子，犧牲自己。從出場表現出最怕死的流浪漢，在危急時刻，竟做出自己被蜂擁而上的喪屍啃咬，讓盛景和秀安可以順利脫逃。
徐錫宇最後為保護女兒和盛景（鄭有美 飾演）讓而全片最毫無人性可言，絕對自私自利的千里馬營運長變成的喪屍咬到而感染病毒，在安撫好兩人後跳下火車自殺。電影的結尾只有一個孕婦和小女孩生還，她們的安全是許多人付出生命換來的。
最後通過隧道將到安全地點時，還多虧了秀安唱出那首準備唱給父親聽的歌，才能才能保住她們的命，否則就成為寧錯殺不放過的韓國軍隊的槍下亡魂。
電影中對喪屍病毒的來源沒有清楚的描述，只透過金代理在災變之時打電話給徐錫宇，告訴他這些怪物都是他們拼命搶救的那艘運油船帶來的。徐錫宇想到運油船是他們力保的那家生技公司所有，前天高層下達要他出清所有股票……難道他們已知病毒感染的事？若是運油船污染水源造成魚群死亡，病毒再由死魚傳染給人類嗎？這成了個大謎團。
《屍速列車》整部電影劇情著重在面臨末日時的人性在恐懼中心仍舊有為愛犧牲的光輝，而不是在如何打爆喪屍，變成最壞最自私的那種人活下去，所以不必有超級英雄出馬來拯救，不須高科技的電腦特效，照樣引起共鳴，收服觀眾的心。
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