和貨船水手一起在世界各地飄泊的老鼠羅斯洛（達斯汀.霍夫曼 配音），熱愛品嚐美食，濃湯對牠各有著致命吸引力。
這次牠們的貨船將在港口停靠三小時，牠跟著水手朋友遊逛市集，剛好遇到一年一度的濃湯節大賽，牠擠在人群中聞著從宮廷窗口傳出來的香味，口水都滴下來了。
顧不得低調，東竄西跳闖入皇宮，牠站在國王和王后的頂上樑，看著廚師將濃湯舀入王后的湯碗裡，多爾國王率先喝一口，讚賞點頭，王后正準備舀湯時，彎腰猛嗅香味的羅斯洛一個沒站穩掉落王后的湯碗裡。
王后與一隻老鼠四目相對，聽到老鼠對她說：我很抱歉。
王后嚇壞了，驚聲尖叫後，咚地趴下，臉跌在湯碗裡，公主忙扶起母親，沒想到王后竟溺斃了。眾多賓客在尖叫錯愕中起身慌亂離開。
多爾國王又驚又怒，命令侍衛緝捕這隻萬惡老鼠，要把牠碎屍萬段。
羅斯洛在宮廷四處奔逃，錯過貨船起航，成為人人喊殺喊打的過街老鼠，只好躲避在宮廷廚房的地下暗道，苟延殘喘。
多爾國王下令，從此刻起，全國不准升火煮熱食，違法者一律斬殺。這個國家就此陷入冷清寂寥，人們失去笑容動力。
在地底富裕老鼠王國的叮鈴家族，出生了個大耳朵的迷你老鼠，父親為牠取名戴斯波（馬修.布羅德里克 配音）。戴斯波除了外表異於同類，個性也與眾不同，牠熱愛閱讀，最喜歡英雄美人，王子拯救公主的故事。最令父母和老師不安的是戴斯波不懂什麼是怕，同學們看見老師展示的貓咪畫報，個個嚇得吱吱叫，或躲避在桌底下，只有戴斯波老臣在在，讚美貓咪可愛。
同學們開始離牠遠遠，連哥哥都怕丟臉，不願跟牠走在於一起。
心碎的多爾國王整日垂眼呆坐，豆豆公主（艾瑪.華特森 配音）對鏡嘆息，向上天祈禱人間煙火可以再回到這個國家，陽光可以再照耀在所有人頭頂。
戴斯波嚮往跟人類接觸，不理會同伴阻止，從密道進到王宮，走入公主寢室，見到豆豆公主。公主被這衣著乾淨華麗，言談舉止彬彬有禮的大耳朵老鼠震懾住，忘了該懼怕討厭老鼠，居然和牠相談甚歡，還約定下次見面時，戴斯波把長髮公主故事結局告訴她。
羅斯洛闖下大禍後，只能在最底層老鼠世界等分殘羹剩湯為生，活得卑賤。這日與戴斯波相遇，聽到牠的遭遇，戴斯波鼓勵牠去向公主道歉，請求原諒。
羅斯洛見到公主，反而把她嚇得花容失色，呼喊侍衛來逮捕牠。羅斯洛受到嚴重打擊，黯黑老大叫唆牠把公主綁架來，成為老鼠群的食物做為報復。
恨意蒙蔽羅斯洛的雙眼和心，牠和公主傻氣醜陋的胖侍女蜜格莉索合謀，綁走公主，日後蜜格莉索取代豆豆成為多爾國公主。
戴斯波在密道中，見到被五花大綁的豆豆，跟隨在後見黑壓壓的骯髒老鼠群朝豆豆逼進。顧不得自身安危，一面勸說羅斯洛，一面展開營救豆豆公主。
《雙鼠記》根據童書所改編，以兩隻不同命運卻同樣犯錯遭到族人驅逐的老鼠，和公主間的情感糾葛，說的是愛、希望、光明和原諒的故事。
戴斯波憑藉自身勇氣，和從書本學習的知識，智取惡徒，本性善良的羅斯洛在公主將成為盤中飱時，良心發現，救走公主。
放下仇恨，陽光再度普照多爾國，國王收起悲憤，振作起來，允許大廚重燃爐火，濃湯重新飄散在國內。人鼠和睦相處，和樂融融。
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