1898年，英國政府在非洲東部興建鐵路，羅伯特·博蒙特爵士（湯姆·威爾金森飾）是肯亞特薩沃一個鐵路建設工程的主要贊助商，由於工程進展緩慢，遠遠落後於計劃，他找來軍事工程師約翰·亨瑞·帕特森中校（方·基默飾），請他到非洲實地監督，務必要讓規程趕上進度，如期完成。
帕特森到達當地後，實際和工人一起工作，進度逐漸趕上，有一晚大家唱歌喝酒吃肉同歡，半夜發生可怕的事，獅子跑進工寮內咬走一名工人，第二天一早，帕特森在翻譯工頭帶領下，找到殘缺不全的屍骸。
獅子吃人事件引起恐慌，在工頭安撫下，工人們仍如常工作，隔幾天又有另一名工頭被獅子吃掉大半身體，離死亡太近，工人們人心惶惶，無心工作，帕特森決定夜裡去獵殺獅子，他躲在樹上等待，運氣極好，一槍就打死了一頭獅子，工人們放下心中恐懼，歡呼聲不斷。
獅子攻擊人並未就此結束，一夜同時出現兩頭獅子，還會聲東擊西，讓帕特森白等了一整夜，隔天工人的屍體在相反方向被發現。
工人告訴帕特森這兩頭獅子是傳說中的「鬼魅」與「黑暗」，人們完全不是牠們的對手。帕特森不信這話，教導工人在帳篷周圍建立起陷阱防禦，獅子卻能躲過陷阱如入無人之境。甚至在白天出現，他們遭受攻擊，帕特森來不及開槍，獅子快速咬死他的同伴，他也被咬傷。工人們實在太害怕了，紛紛離開。
博蒙特爵士向有名獵手查爾斯·雷明頓（麥可·道格拉斯飾）請求幫助。不久雷明頓帶來助手，以及當地人獵捕好手。獅子不但從他們精心設置的陷阱逃脫，還襲擊了安置傷者所建的醫院，咬死醫師和許多人。
雷明頓不相信制服不了獅子，和帕特森擬定詳細計畫，透過足跡追蹤，他們找到了獅子的巢穴，洞穴內堆積的屍骨令人看了不寒而慄。
後來雷明頓雖然成功殺死了其中一頭獅子，但在某個等待的夜晚，被獅子襲擊而亡。憤怒而又絕望的帕特森，決心要和這頭獅子決一死戰。
《暗夜獵殺 》由約翰·亨瑞·帕特森中校所著的《特薩沃食人獅》所改編，描寫的正是從他動身前往非洲，到最終成功擊斃這兩頭獅子的親身經歷。兩頭獅子在非洲屠殺人類造成死傷慘重，短短九個月間便有130位無辜民眾受害。
為了呈現恐怖氣氛，夜戲多，獅子出現時驚鴻一瞥，獅吼聲嚇人。尤其獅子襲擊醫院時，牆壁地面血跡班班，屍塊四散，是全片最血腥的一幕。
鐵路通車那天，妻子帶著出生半年的女兒遠道而來，他開心奔向前去，獅子卻從屋頂一躍而下，咬死帕特森的妻女，他完全嚇呆，看戲人從椅子站起來……，還好這是帕特森的一場夢。
結尾戲是帕特森的妻子帶女兒搭火車來到，帕特森接過女兒，雖然獅子已被擊斃，他仍忘不了那場可怕的夢，警戒的四面張望，依稀聽到獅吼聲。
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